Aplicación del tampón biológico HEPES 7365-45-9 en el kit de detección de lactato deshidrogenasa

Como indicador clave en el diagnóstico clínico y la investigación biológica, la estabilidad y exactitud de los kits de detección de lactato deshidrogenasa (LDH) afectan directamente a la fiabilidad de los resultados experimentales.Entre los diversos componentes del kit de reactivos, el amortiguador biológico de ácido etanosulfónico de 4-hidroxietilpiperazina (El buffer HEPESEl método de detección del pH de las moléculas de carbono se ha convertido en un elemento esencial para mantener la estabilidad del pH en el entorno de detección debido a sus propiedades físicoquímicas únicas.

Propiedades químicas y ventajas del HEPES

El HEPES es un agente de amortiguación biológico zwitteriónico, cuya estructura molecular incluye un anillo de piperazina, hidroxietil y grupos de ácido sulfónico, dotándolo de una excelente capacidad de amortiguación.Su valor de pKa es 7.55, cercano al valor de pH fisiológico, que muestra un rendimiento de amortiguación eficiente en el rango de pH de 6,8-8.2, especialmente adecuado para reacciones biológicas en condiciones neutrales a débilmente alcalinas.El HEPES tiene las siguientes ventajas significativas::

hepes en polvo

1Baja adsorción: su inertitud superficial puede reducir la adsorción no específica de biomoléculas como proteínas y enzimas, evitando errores experimentales;

2Estabilidad a temperatura: no se descompone fácilmente a temperaturas convencionales de laboratorio, adecuado para experimentos a largo plazo y conservación de muestras.

3Biocompatibilidad: no es tóxico para las células, no afecta la actividad enzimática o el metabolismo celular y cumple con los requisitos de seguridad de las pruebas biológicas.

En la detección de LDH, el kit de reactivo debe simular el entorno intracelular in vitro.evitar la distorsión de la actividad enzimática o la degradación de la muestra causada por las fluctuaciones del pH.

El mecanismo del HEPES en el kit de detección de LDH

El principio básico de la detección de LDH es reducir el NAD+ a NADH a través de la reacción enzimática, que reacciona con agentes cromogénicos (como el INT) para generar productos de formaldehído medibles.Durante este procesoEl HEPES garantiza la precisión de la detección mediante los siguientes mecanismos:

1Estabilidad del pH: en el sistema de reacción del kit de reactivos, el amortiguador HEPES puede neutralizar los iones hidrógeno o hidróxido generados durante el proceso de reacción, mantener un pH constante,y garantizar que la reacción enzimática se desarrolle en condiciones óptimas;

2- Antiinterferencia: su baja resistencia iónica puede reducir la interferencia de las impurezas (como sales y proteínas) en la muestra en la reacción,y mejorar la sensibilidad y especificidad de detección;

3. Prolongación de la vida útil: durante la etapa de almacenamiento del kit de reactivos, HEPES puede prevenir la inactivación de enzimas o reactivos de color causada por la deriva del pH y prolongar el período de validez del reactivo.

Tomando un kit de detección de citotoxicidad de la lactata deshidrogenasa como ejemplo, su sistema de reacción incluye tampón HEPES, sustrato de lactato, NAD + y reactivo de color.HEPES tampón (pH 7.5) puede mantener estable el entorno de reacción enzimática, asegurando una relación lineal entre la tasa de generación de NADH y la intensidad de color de los productos de formaldehído,así cuantificar con precisión la actividad de la LDH mediante métodos colorimétricos.

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