Semejanzas y diferencias entre Tris y Tris-ácido clorhídrico y Tris-EDTA
2020-06-23
Tris: aminometano de trimetilol
El trismetilaminometano (Tris) es un compuesto orgánico con la fórmula (HOCH 2) 3CNH 2.Base de Trisse utiliza para preparar tampones en experimentos de bioquímica y biología molecular. Tanto los tampones TAE como los TBE (utilizados para disolver ácidos nucleicos) utilizados en experimentos bioquímicos requieren Tris,que puede condensarse con aldehídos cuando contiene grupos amino. Características de amortiguación Tris es una base débil. A temperatura ambiente (25°C), su pKa es 8.1Según la teoría de amortiguación, el rango de amortiguación efectivo del amortiguador de Tris está entre pH 7.0 y 9.2.
El pH de la solución acuosa de la base Tris es de aproximadamente 10.5En general, se agrega ácido clorhídrico para ajustar el valor del pH al valor deseado, y luego se puede obtener la solución tampón con este valor de pH.Se debe controlar la influencia de la temperatura en el pKa de Tris..
Dado que el tampón de Tris es una solución alcalina débil, el ADN se desprotonará en dicha solución, mejorando así su solubilidad.La gente a menudo agrega EDTA al tampón de ácido clorhídrico de Tris para hacer un "tampón TE". El tampón TE se utiliza para la estabilización y almacenamiento del ADN. Si la solución ácida ajustada por pH se sustituye por ácido acético, se obtiene un "tampón TAE" (Tris/Acetato/EDTA),y si se sustituye por ácido bórico, entonces se obtiene "tampón TBE" (Tris/Borato/EDTA). Estos dos tampones se utilizan en experimentos de electroforesis de ácidos nucleicos.
1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)
Concentración del componente 1M Tris-HCl
Volumen de la preparación 1L
Método de preparación:
1Pese 121,1 gramos de Tris en un vaso de 1 litro.
2Añadir aproximadamente 800 ml de agua desionizada y agitar para disolver.
3Añadir la cantidad de HCl concentrado que se muestra en la tabla siguiente para ajustar el valor de pH requerido.
pH HCl concentrado
7.4 alrededor de 70 ml
7.6 alrededor de 60 ml
8.0 alrededor de 42 ml
4. Lleve la solución a 1 L.
5Después de la esterilización a alta temperatura y alta presión, almacenar a temperatura ambiente.
Nota: Antes de ajustar el valor del pH, dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente, ya que el valor del pH de la solución Tris varía mucho con la temperatura.Cuando la temperatura aumenta en 1 ° C, el valor del pH de la solución disminuye en aproximadamente 0,03 unidades.
1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
Concentración del componente 1,5 M Tris-HCl
Volumen de la preparación 1L
Método de preparación
1Pesa 181,7 gramos Tris en un vaso de 1 litro.
2Añadir aproximadamente 800 ml de agua desionizada y agitar para disolver.
3Ajuste el pH a 8.8 con HCl concentrado.
4. Lleve la solución a 1 L.
5Después de la esterilización a alta temperatura y alta presión, almacenar a temperatura ambiente.
Nota: La solución debe enfriarse a temperatura ambiente antes de ajustar el valor del pH, ya que el valor del pH de la solución de Tris varía mucho con la temperatura,
Por cada aumento de temperatura de 1°C, el pH de la solución disminuye aproximadamente 0,03 unidades.
Las ventajas del amortiguador Tris-HCl son:
1Debido a que la base Tris es más alcalina, se puede utilizar este sistema de amortiguador para preparar una solución amortiguadora con un amplio rango de valores de pH de ácido a alcalino;
2 Poca interferencia en el proceso bioquímico, sin precipitación con iones de calcio, magnesio e iones de metales pesados.
Las desventajas son:
1 El valor del pH de la solución tampón se ve muy afectado por la concentración de la solución, la solución tampón se diluye diez veces y el cambio en el valor del pH es mayor que 0.1;
2El efecto de la temperatura es grande y el cambio de temperatura tiene una gran influencia en el valor del pH de la solución tampón, a saber:031, por ejemplo: el pH de la solución tampón a 4°C=8.4, entonces el valor del pH a 37°C= 7.4, por lo que debe prepararse a la temperatura de uso, el amortiguador Tris-HCl preparado a temperatura ambiente no puede utilizarse a 0 °C ~ 4 °C.
3 Es fácil absorber el CO2 en el aire, por lo que el tampón preparado debe estar bien sellado.
Esta solución tampón interferirá con ciertos electrodos de pH, por lo que debe utilizarse un electrodo compatible con la solución Tris.
La solución de Tris puede absorber dióxido de carbono del aire, prestar atención a sellar durante el almacenamiento, si se requiere esterilidad, se puede añadir azido de sodio.
El TE es el amortiguador Tris-EDTA (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7,4 pH7,6 pH8,0).
Reactivos de biología molecular comúnmente utilizados para la disolución del ADN.
Preparar el amortiguador 10×TE (pH7).4, 7.6, 8.0)
Concentración del componente: 100 mM de Tris-HCl, 10 mM de EDTA
Volumen de la preparación: 1L
Método de preparación:
1. Medir la siguiente solución y colocarla en un vaso de 1 litro.
1M tampón de Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 100 ml
500 mM EDTA (pH8.0) 20 ml
2Añadir aproximadamente 800 ml de agua desionizada al vaso y mezclar uniformemente.
3Después de ajustar el volumen a 1L, esterilizar a alta temperatura y presión.
4Conservar a temperatura ambiente.
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