Por qué se utiliza el tampón HEPES 7365-45-9 en la detección de la lactata deshidrogenasa

La lactato deshidrogenasa (LDH), como una de las enzimas clave en la vía de glucólisis intracelular, sufre cambios en su actividad en diversas condiciones patológicas.La medición precisa de la actividad de la LDH no sólo es de gran importancia para la investigación científica básicaLa elección del amortiguador adecuado es uno de los factores clave para garantizar la exactitud de los resultados de las pruebas durante este proceso.

Ácido etanosulfónico de 4-hidroxietilpiperazina (El buffer HEPES), como amortiguador biológico ampliamente utilizado, se está convirtiendo gradualmente en el componente central de los kits de detección de lactato deshidrogenasa.En este artículo se analizará en detalle desde múltiples perspectivas por qué el tampón HEPES se utiliza en la detección de la lactato deshidrogenasa.

El buffer HEPES

1, Características básicas del HEPES

El HEPES es un amortiguador zwitteriónico que contiene grupos amino y carboxilo, con la fórmula molecular C8H18N2O4S. Es una sustancia poco alcalina, no tóxica,y sólido inodoro con buena solubilidad en agua y estabilidad química.

El rango de amortiguación de HEPES está entre el pH 6,8 y 8.2, y para la detección de LDH, su entorno catalítico suele estar dentro de este rango de pH.El HEPES puede mantener eficazmente la estabilidad de las condiciones de reacción y garantizar la precisión de la medición de la actividad enzimáticaAdemás, la capacidad de amortiguación del HEPES no se ve afectada por la concentración de CO2, que es particularmente importante para el cultivo celular y las reacciones bioquímicas en ambientes abiertos.

2Aplicación del HEPES en la detección de LDH

El HEPES, como uno de los componentes centrales del kit de detección de lactato deshidrogenasa, desempeña múltiples funciones.con reactivo I que contenga el amortiguador biológico HEPES, complejo de iones metálicos, sustrato de reacción de LDH, tensioactivo, activador de la enzima LDH, conservante y agua; el reactivo II consiste en HEPES, NAD + oxidado con nicotinamida adenina dinucleótido, tensioactivo,conservanteAl añadir distintos componentes funcionales por separado, se pueden controlar mejor las condiciones de reacción y reducir las interferencias causadas por la turbidez de la muestra misma.

3, Mejorar la precisión y eficiencia de la detección

Buena estabilidad: el efecto amortiguador proporcionado por el HEPES garantiza la estabilidad del pH durante todo el proceso de detección, lo cual es crucial para la medición de la actividad enzimática.

Alta precisión: Al optimizar la fórmula y aplicar estrictas medidas de control de calidad, se garantizan resultados consistentes para cada prueba.

Amplio rango de pruebas lineales: capaz de cubrir una amplia gama de niveles de actividad de LDH, adaptarse a diferentes tipos de muestras y satisfacer diferentes necesidades clínicas.

Fuerte capacidad antiinterferente: resiste eficazmente la influencia de factores externos como cambios de temperatura o impurezas de la muestra, garantizando la autenticidad de los datos.

No hay necesidad de pre-dilución: simplifica los pasos experimentales, acorta el tiempo de detección, especialmente adecuado para entornos clínicos ocupados.

4Principio de reacción y medición

El proceso de reducción catalizada de LDH del ácido pirúvico a ácido L-láctico es una reacción reversible, y cuando la concentración de ácido láctico es alta, promueve la reacción inversa, es decir,la síntesis de ácido pirúvico a partir de ácido lácticoEn condiciones de pH adecuadas mantenidas en el búfer HEPES, el ácido L-láctico reacciona con NAD+ para producir ácido pirúvico y NADH.lo que significa que la actividad de la LDH puede cuantificarse mediante el seguimiento de los cambios en la absorción.

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