CAS 1135-40-6 CAPS Ácido propanesulfónico de ciclohexilamina para experimentos de amortiguación

Breve introducción

Desde el punto de vista de la estructura molecular, el CAPS es un ácido sulfúmico sustituido por ciclohexano N con un peso molecular de 221,32 y anfótero.Es un muy buen amortiguador biológico con un rango de pH de 9.7-11. ¿Qué quieres decir?1Se utiliza generalmente para experimentos de WB. Amortizador para membrana de transferencia de proteína PVDF o membrana de transferencia de nitrocelulosa NC.

Puertor de las CAPS

WB es la abreviatura de Western Blot Protein Immunoblotting Experiment. El principio es colorear células o muestras biológicas tratadas por electroforesis con anticuerpos específicos.y obtener la expresión de proteínas específicas en las células o tejidos analizados analizando la posición y la profundidad de la coloraciónLas notas experimentales son las siguientes:

1. Electróforesis SDS-PAGE: similar al método de hibridación de ácidos nucleicos, excepto que lo detectado es la proteína, la sonda es el anticuerpo y el anticuerpo secundario coloreado está etiquetado.Hablando en general, el sistema de amortiguación de Tri-Glicerina o Tris-Tricina se utiliza para proteínas de bajo peso molecular, y el sistema de amortiguación de CAPS es mejor para proteínas de alto peso molecular.La glicina en el amortiguador afectará la secuenciación, por lo que el búfer de transferencia utilizado para la secuenciación es 10mM/1CAPS10% metanol. La concentración de metanol en el búfer de electroimpresión CAPS es de 0-20%.un amortiguador con una alta concentración de metanol tiene un buen efecto de transferencia en proteínas de bajo peso molecular, mientras que un amortiguador con una baja concentración de metanol o incluso sin metanol es bueno para proteínas de alto peso molecular.

2Cuando la membrana de PVDF esté procesada, remojarla en metanol durante unos segundos y luego ponerla en el tampón de electroimpresión CAPS. Las operaciones de seguimiento deben evitar que la membrana se seque.Si la membrana del PVDF se seca, repita los pasos anteriores. El gel de electroforesis también debe empaparse en el tampón CAPS durante 5-10 minutos. Algunas proteínas fuertemente básicas no necesitan este paso.

3Las condiciones de transferencia son generalmente 50V de voltaje constante, 100-170mA de intensidad de corriente y transferencia de electroimpresión a temperatura ambiente..En el caso de las proteínas con mayor peso molecular, hay que prestar atención a prolongar el tiempo de transferencia.

Embalaje del producto

4Antes de teñir, la membrana de PVDF debe retirarse y enjuagarse con agua desionizada, empapada en metanol, luego teñida con un 0,1% de azul brillante de Coomassie durante 30-50 segundos, descolorida con un 50% de metanol,Lavados con agua desionizada y secados.

Lo anterior presenta algunos asuntos que necesitan atención en el experimento de impresión de proteínas.Por favor, use ropa de laboratorio y guantes desechables para la operaciónSe recomienda que el buffer de impresión eléctrica CAPS se produzca por: El DeshengLa configuración del ácido propanesulfónico de ciclohexilamina de alta calidad.