¿Cuándo usted utilizaría un almacenador intermediario de Hepes?

El nombre completo deEl buffer HEPESes el ácido etanosulfónico de 4-hidroxietilpiperazina, el CAS es 7365-45-9, el HEPES se utiliza a menudo en amortiguadores biológicos, rango de amortiguador de pH: 6.8-8.2, el principal componente del tampón de hepes es el ácido sulfúrico etilo hidroxietilpiperazina, el HEPES es un tampón anfotérico, que es soluble en agua y no forma complejos estables con iones metálicos.Tiene una buena capacidad de amortiguación en el rango de pH de 7.2 a 7.4Se utiliza principalmente en kits de diagnóstico bioquímico, kits de extracción de ADN / ARN y kits de diagnóstico PCR.

Se utiliza en una variedad de reacciones bioquímicas:

1. HEPESel bufferse utiliza a menudo como reactivo tampón en el medio de cultivo celular de varios tipos de organismos, adhesión célula-célula, agregación y cultivo de células a corto plazo, y tampón para limpiar tejidos y células;

2En la investigación de proteínas, el PIPES se utiliza a menudo como componente y eluente del amortiguador de unión en la cromatografía de intercambio catiónico.

3En la investigación del ADN, PIPES se utiliza como amortiguador para el fosfato de calcio y el sistema de formación de precipitados de ADN, y como amortiguador para los experimentos de AFM y electroporación.

4Además, el HEPES tiene una cierta interferencia en la reacción entre el ADN y las enzimas de restricción, y no es adecuado para el método de Lowry para determinar el contenido de proteínas.

5El tampón HEPES se utiliza a menudo en la investigación de orgánulos y proteínas y enzimas altamente variables y sensibles al pH, así como en kits de diagnóstico bioquímico.Los kits de extracción de ADN/ARN y los kits de diagnóstico por PCR.

6. El búfer de reacción, el búfer de prehibridación y el búfer de hibridación para separar y analizar componentes nucleares de ARN; utilizado para ARN y ARNT4.El grado de biología molecular se utiliza para etiquetar el 3' final del ARN con la ligasa de ARN T4, separar y analizar los componentes del búfer de reacción, búfer de prehibridación y búfer de hibridación del ARN nuclear.

HEPES en polvo

Cuestiones relacionadas con el HEPES

1El pH requerido para la mayoría de las células es de 7.2-7.4Los fibroblastos prefieren un pH más alto (7,4-7,7), mientras que el paso de las líneas celulares transformadas requiere acidez.0 a 7..4) Dado que la mayoría de los fluidos de cultivo se amortiguan mediante el sistema de bicarbonato de sodio (NaHCO3) y CO2,la concentración de CO2 en la fase gaseosa debe estar en equilibrio con la concentración de bicarbonato de sodio en el fluido de cultivoSi la concentración de CO2 en la fase gaseosa o en el aire de la incubadora se fija en el 5%, la cantidad de NaHCO3 añadida a la solución de cultivo es de 1,97 g/l; si la concentración de CO2 se mantiene en el 10%,la cantidad de NaHCO3 añadida a la solución de cultivo es 3.95 g/l. La tapa del biberón de cultivo celular no debe atornillarse demasiado para garantizar el intercambio de gases;

2El valor del pH de la solución de cultivo utilizando el par de amortiguadores HCO3 y CO2 es inestable y tiende a ser alcalino después del almacenamiento durante cierto tiempo.Si el pH del líquido de cultivo cambia demasiado rápidamente, el tampón HEPES puede añadirse al fluido de cultivo hasta una concentración final de 10-25 mM;

3. El HEPES es un amortiguador anfótero, utilizado principalmente en investigación biológica, como la fosforilación oxidativa, la síntesis de proteínas en un entorno estéril, la fosforilación fotosintética, la fijación de CO2, etc.;El HEPES no tiene efecto sobre los sustratos de la ionasa metálica y es adecuado para su transmisión en microscopía electrónica (TEM).En los medios de cultivo celular, la ventaja es que puede mantener un valor de pH relativamente constante durante el cultivo abierto o la observación celular.o como adición de bicarbonato tampón (10-15mM) para aliviar la restricción del ambiente de cultivo de CO2 de alta concentraciónEl CO2 disuelto y el bicarbonato también son muy importantes para un buen crecimiento celular.