En la biología celular y la investigación de la biología molecular, las células 293T, como una línea de células renales embrionarias humanas transformadas,se han convertido en un sistema modelo popular en la investigación científica debido a su fácil transfección y buena expresión de genes exógenosPara garantizar que estas células puedan crecer de forma saludable y mantener sus características biológicas, es crucial un control preciso de las condiciones de cultivo, siendo una de las bases la estabilidad del pH.El buffer HEPESEl ácido (4- (2-hidroxietil) -1-piperazineetanosulfónico) desempeña un papel insustituible como buen amortiguador para mantener la estabilidad del pH en los medios de cultivo celular.Este artículo profundizará en el rango de pH apropiado de HEPES y sus estrategias de aplicación en cultivo celular al cultivar células 293T.
El papel y la importancia del HEPES
El HEPES es un excelente agente de amortiguación orgánico que puede mantener la estabilidad del pH de las soluciones en un amplio rango de pH (generalmente de 6,8 a 8,2).No interfiere con la mayoría de las reacciones bioquímicas y no forma complejos estables con iones metálicosPara las células 293T, la adición de HEPES ayuda a reducir las fluctuaciones del pH causadas por la actividad metabólica,garantizar que las células se encuentran en un entorno de crecimiento adecuado.
Ambiente de pH ideal para las células 293T
Aunque el HEPES en sí tiene una amplia capacidad de amortiguación, la configuración del pH del medio de cultivo para las células 293T debe tener en cuenta las preferencias fisiológicas de las células.Las investigaciones han demostrado que la línea celular 293 (incluida la 293T) prefiere un ambiente ligeramente ácido.Sin embargo, en la práctica, teniendo en cuenta el efecto amortiguador del HEPES y la universalidad de los medios de cultivo celular, el HEPES puede ser utilizado en el tratamiento de la infección por el VIH.generalmente se recomienda ajustar el valor del pH del medio de cultivo entre 7.0 y 7.2Esto no sólo satisface la preferencia de las células por un ambiente ligeramente ácido, sino que también garantiza la eficacia del sistema de amortiguación HEPES,evitar la inhibición del crecimiento celular o anormalidades morfológicas causadas por la alcalinidad.
Estrategias de ajuste en la práctica
1- La cantidad de HEPES añadida:la adición de una cantidad adecuada de HEPES puede amortiguar eficazmente las sustancias ácidas producidas por el metabolismo celular durante el cultivo celular y mantener la estabilidad del pH.
2El uso de NaHCO3 para ajustar el pH: aunque el HEPES es el principal componente de amortiguación, también es necesaria la adición de NaHCO3 al medio de cultivo para ajustar preliminarmente el valor del pH al rango objetivo.Cabe señalar que las diferencias de pureza y de fabricación de NaHCO3 de diferentes lotes pueden provocar ligeros cambios en el valor del pH.Por lo tanto, cuando se utilice un nuevo lote de NaHCO3, se debe calibrar un medidor de pH para garantizar que el pH del medio de cultivo caiga entre 7-7.2.
3Monitoreo y ajuste regular: durante el proceso de cultivo celular, el valor del pH del medio de cultivo debe ser monitoreado regularmente y ajustado según sea necesario.Aunque el HEPES proporciona una fuerte capacidad de amortiguación, el cultivo celular prolongado o el cultivo celular de alta densidad pueden provocar un cambio gradual del pH.La sustitución oportuna del medio de cultivo fresco o la adición adecuada de amortiguador HEPES es clave para mantener un buen estado de cultivo..
4- Ajuste personalizado: las condiciones experimentales en los diferentes laboratorios (como la concentración de dióxido de carbono, la temperatura, etc.)) y el número de pasajes celulares pueden afectar la sensibilidad de las células al pH., por lo que es esencial hacer ajustes personalizados según la situación real, siguiendo los principios básicos.
En resumen, comprender y controlar el rango de pH apropiado de HEPES es un paso fundamental e importante para nutrir las células 293T. Al asignar adecuadamente el uso de HEPES y NaHCO3,combinado con un seguimiento y un ajuste regular, se puede crear un ambiente de crecimiento cercano al estado ideal para las células 293T, mejorando así la fiabilidad del experimento y reduciendo la reproducibilidad.El cultivo de células es tanto una ciencia como un arte., y los ajustes sutiles a menudo pueden conducir a mejoras significativas en los resultados experimentales.Agentes de amortiguación biológicos, Desheng puede suministrar materias primas con 99% de pureza para que los fabricantes preparen y usen, lo cual es conveniente, simple y tiene un rendimiento de amortiguación estable.Siéntase libre de preguntar por los detalles.!
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