¿Cuáles son los efectos del almacenador intermediario sobre la proteína?

Las buenas soluciones tampón pueden reducir grandemente la gama de fluctuación del pH al añadir una pequeña cantidad de ácido o base y agua, una solución mezclada del ácido débil y de su sal (tal como HOAc y NaOAc), una solución mezclada de la base débil y su sal (tal como NH3·H2O y NH4Cl) etc. son todos los almacenadores intermediarios. Los almacenadores intermediarios son ampliamente utilizados en experimentos bioquímicos y desempeñan un papel importante en curso de separación y purificación de la proteína.

La separación y la purificación de la proteína es una tarea compleja, y el proceso de la purificación de cada proteína no es exactamente lo mismo. Por lo tanto, solamente usando la purificación apropiada de la proteína los métodos en el proceso de la extracción y de la preparación de la proteína pueden una proteína estable ser obtenidos. En el proceso, la estabilidad de la proteína depende del sistema de varios componentes del almacenador intermediario utilizó. La mejor condición es disolver la proteína mientras que mantiene actividad biológica.

Puesto que la mayor parte de la purificación de la proteína se realiza in vitro, los sistemas del almacenador intermediario correspondiente a las proteínas recombinantes en el mercado pueden imitar las condiciones de proteínas naturales in vivo para alcanzar el propósito del almacenamiento y del transporte estables de la proteína.

La función principal del almacenador intermediario es proporcionar el ambiente más conveniente para la proteína de la blanco. En curso de selección y preparación de almacenadores intermediarios, los factores siguientes deben ser considerados:

1. Composición del almacenador intermediario:

El componente del almacenador intermediario sí mismo del almacenador intermediario no debe obrar recíprocamente con la proteína. Por ejemplo, algunas enzimas son inhibidas por el grupo del fosfato de almacenador intermediario de fosfato, que puede llevar a la pérdida de función de la proteína. También muestra que el almacenador intermediario conveniente para cada proteína no es exactamente lo mismo, así que los usuarios deben intentar elegir el almacenador intermediario recomendado en el manual al disolver la proteína para asegurar la estabilidad de la proteína y de la actividad correspondiente. Las gamas de concentración típicas del almacenador intermediario de 20 a 100 milímetro, y pueden ser necesarios añadir otros componentes a las proteínas o a los iones fuerza-sensibles iónicos del metal tales como magnesio (la solución de sal es 150 milímetros), que es necesario para que algunas enzimas sean activo.

2. pH:

El pH depende del uso real de la proteína. Si la proteína se utiliza con certeza los tipos de análisis biológicos, tales como análisis de enzima, el pH en los cuales la enzima muestra la mejor actividad deben ser seleccionados. Al preparar las proteínas para las técnicas de la purificación (intercambio de iones, filtración de gel, etc.), el pH se debe seleccionar según las condiciones experimentales para obtener la eficacia máxima de la purificación. Cuando un pH específico no se requiere, el pH en el cual la proteína exhibe la mejor estabilidad es el mejor. Esto es especialmente verdad para el almacenamiento de la proteína.

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