Experimento de la verificación del efecto de la inactivación de los medios del transporte del virus

Hay dos tipos de medios del transporte del virus añadidos en el tubo de muestreo del virus, uno es la solución desactivada de la preservación del ácido nucléico modificado del virus de la extracción lítica de la proteína, y el otro es el mantenimiento de la actividad in vitro del virus, su ácido nucléico y el antígeno modificado basado en el transporte medio termina la solución no-desactivada de la preservación. Para las soluciones desactivadas de la preservación, es importante desactivar virus eficientemente y prevenir la infección secundaria.

Diferente del tipo no-desactivado, el medio desactivado del transporte del virus se añade con una alta concentración de sal de la lisis, que puede desactivar el virus eficientemente y puede prevenir con eficacia al operador de la infección secundaria. Pero también contiene los inhibidores de la ARNasa, que pueden proteger el ácido nucléico viral contra la degradación, para poderlos detectar posteriormente por NT-PCR. El efecto de la inactivación se verifica experimental abajo.

1. Materiales de la verificación de la inactivación

1 embrión del pollo del SPF (y tramado a 10 días de viejo en sí mismo)

2 tensión infecciosa del virus IBV QXL87 de la bronquitis del pollo

3 salinos normales (0,9% NaCl), esterilizado

4 soluciones desactivadas del almacenamiento de la muestra, 3 lotes.

5 equipos de la extracción del ARN

El medio del transporte del virus desactiva virus

2. Métodos experimentales

1. Añada la tensión infecciosa preparada del virus QXL87 de la bronquitis del pollo a la solución de la preservación, según el ratio de 1 (solución viral): 10 (solución de la preservación), y fijaron la temperatura ambiente en 18-26℃ para 45min. El líquido del virus fue inoculado en embriones del pollo del SPF, y el líquido alantoico fue cosechado.

2. Inocule el líquido alantoico cosechado en 1 en 10 embriones viejos del pollo del SPF de los días según el método alantoico de la inoculación de la cavidad. Cada muestra se inocula con 10 embriones del pollo, 0,1 mL/piece, se coloca en una incubadora 37°C para 144 h y se desecha. Después de 24 h de los embriones muertos del pollo, observe y registre 24-44 h de las muertes del embrión del pollo y del número de embriones vivos enfermos después de la inoculación. Observación de las lesiones del embrión del pollo, y la detección de ácido nucléico del virus infeccioso de la bronquitis del pollo en el flúido alantoico cosechada, refiriendo a tecnología de diagnóstico de la bronquitis infecciosa del pollo de GB/T 23197-2008, usando equipo de la extracción del ARN para extraer el ARN, y usando el método de un solo paso RT-qPCR en tiempo real para la detección del virus.

Agrupe 1/2/3 virus añadido (100ul) + la solución de la preservación (900ul); El grupo 4 añadió el virus (100ul) + salino fisiológico (900ul); Solución añadida de la preservación del grupo 5/6/7 (1000ul). Entre ellos, el medio del transporte del virus está en tres lotes.

3. Resultados experimentales

Según los resultados experimentales antedichos, los grupos 1, 2 y 3 fueron inoculados con los preservativos virales, que mostraron que los embriones del pollo crecieron normalmente; el grupo 4 fue inoculado con las lesiones salinas, y del pollo fisiológicas virus-añadidas del embrión; los grupos 5, 6, y 7 fueron inoculados con los preservativos, no mostrando ninguna inhibición del crecimiento del embrión del pollo. Esto indica que la solución desactivada de la preservación puede desactivar virus.

Con este experimento, podemos finalmente mostrar que los tres lotes de muestreo al azar de Desheng desactivaron la solución de la preservación pueden desactivar con eficacia el virus, y no tiene ningún efecto inhibitorio sobre la función fisiológica normal de las células. Por lo tanto, este medio desactivado del transporte del virus puede desactivar eficientemente diversos virus y extraer los ácidos nucléicos, que es conveniente para los experimentos de la detección del ácido nucléico RT-qPCR. ¡Por supuesto, debido a la prueba más rápida, que se utiliza directamente para la detección de pacientes diagnosticó con la nueva corona, pocas compañías en China hará así pues, porque con todo el nuevo virus de la corona no es tan fácil de obtener!