En los campos de la bioquímica y la biología molecular, la detección de la actividad enzimática es uno de los medios importantes para comprender los procesos bioquímicos complejos en los organismos,evaluar los estados fisiológicosEn la actualidad, la mayoría de los países de la Unión Europea están en vías de desarrollar nuevas tecnologías de detección de enfermedades, como el diagnóstico de enfermedades.HDAOSReactivo (N-etil-N - (2-hidroxi-3-sulfopropilo) -3,5-dimetoxianilina sal de sodio), como nuevo reactivo colorimétrico, ha mostrado ventajas únicas en la detección de la actividad enzimática.Este artículo profundizará en la aplicación del HDAOS en la detección de la actividad enzimática, analizar sus principios, ventajas y perspectivas futuras.
1、 Características y principios básicos del HDAOS
El HDAOS es un derivado altamente soluble en agua de la anilina, y sus características estructurales le confieren una excelente estabilidad y sensibilidad.HDAOS se utiliza generalmente como un sustrato cromogénico o indicador para participar en la reacciónEl principio básico es que en presencia de peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) u otros oxidantes, el HDAOS puede someterse a reacciones de oxidación para producir productos coloreados.Este cambio de color es directamente proporcional a la cantidad de peróxido de hidrógeno u otros productos de oxidación producidos en reacciones catalizadas por enzimas, que refleja indirectamente el nivel de actividad enzimática.
La aplicación específica del HDAOS en la detección de la actividad enzimática
1Detección de la actividad de la catalasa
La catalase (CAT) es una importante enzima antioxidante en los organismos vivos que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, protegiendo así a las células del daño oxidativo.En la detección de la actividad de la catalase, HDAOS actúa como un sustrato cromogénico y reacciona con el peróxido de hidrógeno bajo la catalización de la peroxidasa (como la peroxidasa del rábano picante HRP) para generar tintes púrpura o azul estables.Mediante la medición de la absorbancia del producto de reacciónEn el caso de las catalasas, la concentración de peróxido de hidrógeno puede calcularse para evaluar la actividad de la catalasa.
2Detección indirecta de otras actividades enzimáticas
Además de detectar directamente la actividad de la catalase, HDAOS can also be combined with other enzyme systems to indirectly evaluate the activity of related enzymes by monitoring changes in hydrogen peroxide or other oxidation products produced during the reaction processPor ejemplo, en el sistema de glucosa oxidasa (GOD), la glucosa se oxida a ácido glucónico bajo la catálisis de GOD, produciendo peróxido de hidrógeno.el peróxido de hidrógeno reacciona con HDAOS bajo catálisis de HRP para producir productos de colorMediante la medición de la absorción del producto, se puede calcular la concentración de glucosa, que refleja indirectamente la actividad del GOD.Este método tiene una amplia perspectiva de aplicación en el diagnóstico de la diabetes, monitoreo de la glucosa en sangre y otros campos.
Las ventajas del HDAOS en la detección de la actividad enzimática
1. Alta sensibilidad
El HDAOS tiene una velocidad de reacción rápida con oxidantes como el peróxido de hidrógeno y puede formar reacciones de color estables en un corto período de tiempo, lo que lo hace altamente sensible en la detección de la actividad enzimática.Incluso si la actividad enzimática es baja, se pueden obtener resultados precisos mediante mediciones precisas.
2- Tiene una gran estabilidad.
El HDAOS presenta una buena estabilidad durante el almacenamiento y el uso, y no se oxida ni se descompone fácilmente, lo que garantiza la precisión y fiabilidad de los resultados de detección.Su alta solubilidad en agua también hace que se distribuya uniformemente en la solución, mejorando la eficiencia de la reacción.
3Buena selectividad
El HDAOS tiene una alta selectividad hacia oxidantes como el peróxido de hidrógeno y puede determinar con precisión sus concentraciones en muestras complejas, evitando la interferencia de otras sustancias.Esto mejora la especificidad y precisión de la detección.
4Es fácil de operar.
El método de detección de actividad enzimática basado en HDAOS suele ser fácil de operar, rápido y no requiere pasos complejos de pretratamiento de la muestra o equipos de instrumentos costosos.Esto hace que sea adecuado para una amplia aplicación en la investigación de laboratorio y el diagnóstico clínico.
Resumen de las actividades
En resumen, el HDAOS, como nuevo reactivo colorimétrico, ha demostrado ventajas únicas y aplicaciones potenciales en la detección de la actividad enzimática.Con el continuo avance de la ciencia y la tecnología y la expansión de los campos de aplicación, desempeñará un papel cada vez más importante en la investigación en ciencias biológicas y en el diagnóstico clínico.
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