Como todos sabemos, el mercado interno de IVD tiene una demanda creciente de inmunoensayos, y varios tipos de inmunoensayos están surgiendo.ha reemplazado gradualmente los ensayos inmunológicos ELISASegún el método, la quimioluminiscencia puede dividirse en: quimioluminiscencia directa, quimioluminiscencia enzimática y electroquimioluminiscencia.Luminol En la actualidad, se han desarrollado estudios sobre el uso de los esteros de acridinio en la quimioluminiscencia enzimática y en la quimioluminiscencia directa, respectivamente.el luminoly el éster de acridinio en quimioluminiscencia.
I Immunoensayo con enzimas quimioluminiscentes
El ensayo inmunológico con enzimas quimioluminiscentes (CLEIA) es un ensayo inmunológico etiquetado con enzimas que utiliza un agente quimioluminiscente como sustrato para una reacción enzimática.Después de la amplificación en dos etapas de la enzima y la luminiscenciaPeroxidasa se utiliza como una enzima de etiquetado,el luminol se utiliza como sustrato luminiscente, y se añade un potenciador de la luminiscencia para mejorar la sensibilidad y la estabilidad de la luminiscencia.el sustrato luminiscente es el fosfato de dioxetano, y el portador de la fase sólida son las partículas magnéticas.
Quimioluminiscencia del luminol
II Imunología por quimioluminiscencia directa
La prueba inmunológica por quimioluminiscencia (CLIA) es un tipo de prueba inmunológica que marca directamente los antígenos o anticuerpos con agentes quimioluminiscentes.Estero de acridinioes un sustrato luminiscente ideal y puede ser oxidado por peróxido de hidrógeno en un ambiente alcalino para emitir luz. El agente quimioluminiscente utilizado como etiqueta debe cumplir las siguientes condiciones:
1Puede participar en reacciones de quimioluminiscencia.
2Reactivo conjugado estable después del acoplamiento con antígeno o anticuerpo.
3Después del acoplamiento, el efecto cuántico y el poder de reacción se conservan.
4No debe alterar o alterar raramente las propiedades físicas y químicas de la sustancia etiquetada, especialmente la actividad inmune.
La ventaja de este método es que no se ve afectada por la excitación, la dispersión de la luz o la diferencia de punto.La figura siguiente muestra esquemáticamente el mecanismo de quimioluminiscencia directa del método sandwich.La figura siguiente muestra esquemáticamente el mecanismo de quimioluminiscencia directa del método sandwich.
III En general,LuminolLos agentes luminiscentes de acridina y éster son los agentes luminiscentes más utilizados.Luminolse utiliza como sustrato quimioluminiscente enzimático junto con la peroxidasa del rábano picante para la quimioluminiscencia indirecta con una longitud de onda máxima de 425 nm. Las características de la reacción son:alta sensibilidad y buena estabilidad de la enzimaSin embargo, la desventaja es que el tiempo de excitación más largo resulta en una velocidad relativamente lenta, lo que puede ocultar los sitios de reacción de anticuerpos durante el proceso de etiquetado.Antu Biology y otros están usando este método.
Como marcador luminiscente directo, el éster de acridina debe realizarse en condiciones alcalinas que contengan H2¿ Qué?2La longitud de onda máxima de emisión de luz es de 430 nm. Las características de reacción son: el sistema de luminiscencia es simple y rápido, y la luminiscencia se completa en 5 segundos,y no se necesita catalizador, pero el éster de acridinio es inestable en la sal tampón y fácilmente hidrolizado.
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