HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-ácido piperazineetanosulfónico) es un amortiguador zwitteriónico, número CAS 7365-45-9,Este amortiguador se utiliza generalmente en experimentos bioquímicos para ajustar el pH del sistema de reacción.No es tóxico para las células y mantiene el pH durante mucho tiempo, siempre se aplica en el medio de cultivo celular y en cosméticos.
El buffer HEPESes un amortiguador anfóterico no iónico con buena capacidad de amortiguamiento en el rango de pH 7,2-7.4Su característica principal es mantener un valor de pH relativamente estable en el medio de cultivo o en la observación celular.las tapas de los frascos de cultivo celular deben ser apretadas con fuerza para evitar que el carbonato requerido escape al aire..
La forma de preparar el búfer HEPES.
Se puede añadir tampón de hepes directamente al medio de cultivo preparado con la concentración requerida, seguido de esterilización por filtro.Añadir 2,38 gramos de polvos de hepes a cada 1000 ml de solución de cultivo,ajustar el pH a 7.2 con 1NNaOH después de disolverse, filtrarse y esterilizarse antes de aplicarse, en este momento, la concentración de HEPES es de 10 mmol/L.
Añadiendo 99 ml de solvente de cultivo celular en 1 ml de solución base, la concentración de HEPES también es de 10 mol/L. A continuación se muestra la forma de preparar la solución base de HEPES con 1 mol/L. Primero, disolver 23.8 g de HEPES en 90 ml de agua doble destiladaEn segundo lugar,se ajusta el pH a 7,5 a 8,0 con 1N NaOH; en tercer lugar,se elaboran hasta 100 ml con un titrador de agua; luego,se filtran y esterilizan antes de empacarse en un frasco de 2 ml; por último se almacenan a 4°C o -20°C.
Con una resistencia a altas temperaturas y un punto de fusión de hasta 200°C, el polvo de HEPES no se degrada en autoclave.si la solución acuosa de HEPES se expone a la luz ambiente durante tres horasPor lo tanto, hay que prestar atención a dos puntos:una es que la solución acuosa de HEPES debe mantenerse alejada de la luz para no afectar a los resultados experimentalesUna vez configurado como disolvente, debe almacenarse a 4 °C y utilizarse en un corto período de tiempo para obtener mejores resultados.Otro se coloca generalmente en una habitación seca y no puede exponerse directamente a la luz solar durante mucho tiempo..
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