Varios factores que se deben considerar antes de la reacción de la quimioluminescencia

El ensayo de quimioluminiscencia se está volviendo cada vez más popular debido a su excelente sensibilidad de detección.el luminolEn el análisis químico, las reacciones de quimioluminiscencia se utilizan para detectar los analitos directamente covalentemente etiquetados con compuestos de quimioluminiscencia.La activación de una etiqueta quimioluminiscente para una reacción luminiscente genera una señal para la detección del analitoLa ventaja de este método es que es más sencillo y claro, y evita la necesidad de etiquetas más grandes y relativamente "pegadizas".si se trata de una etiqueta enzimática o una etiqueta directa, y cómo determinar la intensidad de la luz debe considerarse antes de diseñar la reacción.

El método común para generar quimioluminiscencia es utilizar enzimas etiquetadas para catalizar la reacción de quimioluminiscencia.Cada etiqueta puede iniciar múltiples reacciones de quimioluminiscenciaEl compuesto quimioluminiscente se suministra en exceso como un sustrato enzimático para garantizar la cinética de saturación.La intensidad de la luz es una función lineal de la cantidad de enzima etiquetadaLa intensidad, la velocidad de emisión de fotones por segundo, es el producto de la conversión catalítica del sustrato y la vida útil del compuesto luminiscente.

El gráfico de distribución de la intensidad/tiempo de la quimioluminiscencia incluye un período inicial de aumento y la extensión de la luminiscencia hasta la meseta o la falsa meseta.indica que el sustrato se ha agotado o que la enzima está inactivada.La detección de la quimioluminiscencia producida por las enzimas proporciona una gran flexibilidad en el proceso de medición.La intensidad de la luz en cualquier punto del tiempo que pasa a través del punto más alto puede estar relacionada con la cantidad de enzimaSi la velocidad es un problema de medición de tipo de pendiente de un punto o de varios puntos, se puede medir en la parte ascendente.no hay muchos compuestos quimioluminiscentes adecuadosLos candidatos adecuados deben tener ciertas funciones para permitir la conexión con otras moléculas.debe emitir toda la luz en el menor tiempo posible.

Cuando la quimioluminiscencia se emite gradualmente durante un período de tiempo, la intensidad de la señal (fotones/segundo) disminuye,y es mejor determinar el número óptimo de etiquetas de quimioluminiscencia en la especie a detectar basándose en la experienciaIncluso si teóricamente más etiquetas deberían proporcionar más fotones, si las etiquetas están espaciadas demasiado juntas, se producirá un efecto de apagado.La superficie y el número de grupos derivables (generalmente grupos amino o mercapto) proporcionan restricciones adicionales.En la práctica, hasta 10 a 20 etiquetas pueden unirse a una macromolécula.cuanto más probable sea que la etiqueta interfiera con sus propiedades de unión.

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