La determinación de los ácidos grasos libres en suero o plasma se realiza generalmente mediante el método fotométrico de las enzimas cromógenas de Trinder.La detección de ácidos grasos se ve afectada por muchos factores, y el método de detección debe ser optimizado y mejorado para mejorar la precisión de la detección.
Principio de detección del cromógeno del trindor FFA:
El método de detección tiene tres etapas de reacción: los ácidos grasos libres (FFA o NEFA) reaccionan con el exceso de CoA para generar acil-CoA bajo la acción de la acetil-CoA sintasa (ACS),y reacciona con el oxígeno bajo la acción de la acetil-CoA oxidasa (ACO)La reacción genera 2,3-transenoyl CoA y peróxido de hidrógeno, y la reacción de Trinder se utiliza para detectar el peróxido de hidrógeno, y el contenido de FFA se puede obtener.
Se recomienda TOPS para la determinación de la FFA del cromógeno
Problemas en los métodos de determinación y optimización de FFA:
1El exceso de coenzima A en la reacción interferirá con la reacción del peróxido de hidrógeno y el cromógeno Trinder, haciendo que el resultado del ensayo sea bajo.La N-etilmaleimida (NEM) se puede utilizar para eliminar el exceso de coenzima A.La estabilidad del NEM está muy afectada.
2La acetil CoA sintetasa y la acetil CoA oxidasa utilizadas tienen diferentes especificidades de sustrato para diferentes ácidos grasos libres, lo que provoca diferencias en los resultados de determinación.Diferentes fuentes de enzimas tienen diferentes especificidades de sustrato para ácidos grasos libres con diferentes longitudes de cadena CEs decir, la capacidad de respuesta es diferente. Hay 6 tipos de FFA en el suero humano, y sólo las enzimas con alta especificidad para ellos no pueden hacer ninguna diferencia en los resultados de medición.
3Debido a la influencia de la CoA en la reacción, el rango lineal de los resultados de los datos es estrecho.y debe ser excesivo, por lo que se requiere interferencia. Menos cromógeno. SCEP no es interferido por la coenzima A pero es inestable. ADOS y TOPS son menos interferidos por CoA, y TOPS tiene un mayor coeficiente de absorción molar,Así que es un mejor sustrato cromogénico.
4. Agrega el complejo de sulfhydryl DTNB y MIT para reducir la cantidad de NEM. El grupo sulfhydryl de DTNM puede reaccionar con el grupo sulfhydryl de CoA para eliminar la interferencia con el cromógeno.Una pequeña cantidad de MIT puede eliminar el grupo sulfhydryl de CoA y también actúa como conservanteBasándose en el uso de cromógeno TOPS, la interferencia de CoA puede eliminarse por completo y la estabilidad mejora en gran medida.
Si tiene requisitos más elevados para los resultados de determinación de FFA, puede elegir un kit de mejor calidad basado en los puntos anteriores.Desheng produce las materias primas para el FFA y otros kits de determinación de índicesSi se utiliza TOPS para determinar directamente la FFA, debido a la escasa estabilidad de la solución, se recomienda preparar una solución de trabajo para su uso inmediato antes de su uso.
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