Optimización del método de los TOPS para la determinación de ácidos grasos libres

La determinación de ácidos grasos libres en suero o plasma adopta generalmente método fotométrico de la enzima del cromógeno de Trinder. Sin embargo, debido a las características de esta prueba, la detección de ácidos grasos es afectada por muchos factores, y el método de detección necesita ser optimizado y ser mejorado para mejorar la exactitud de la detección.

Principio de la detección FFA del cromógeno de Trinder:

El método de detección tiene tres pasos de la reacción: los ácidos grasos libres (FFA o NEFA) reaccionan con exceso de CoA para generar el acil-CoA bajo acción del synthase acetilo-CoA (ACS), y reaccionan con oxígeno bajo acción de la oxidasis acetilo-CoA (ACO). La reacción genera 2,3 peróxido del CoA transporte-enoyl y de hidrógeno, y la reacción de Trinder se utiliza para detectar el peróxido de hidrógeno, y el contenido de FFA puede ser obtenido.

Los TOPS se recomiendan para la determinación de FFA del cromógeno

Problemas en métodos de la determinación y de la optimización de FFA:

1. La coenzima excesiva A en la reacción interferirá con la reacción del peróxido de hidrógeno y del cromógeno de Trinder, haciendo el punto bajo entero del resultado de la prueba. N-ethylmaleimide (NEM) se puede utilizar para quitar exceso de la coenzima A. La estabilidad de NEM es muy afectada. Limitado, solamente una semana.

2. La oxidasis del CoA de la ligasa y del acetilo del CoA del acetilo usada tiene diversas especificidades del substrato para diversos ácidos grasos libres, causando diferencias en los resultados de la determinación. Diversas fuentes de enzima tienen diversos ácidos grasos de las especificidades del substrato gratis con diversas longitudes de cadena de C. Es decir, la capacidad de la respuesta es diferente. Hay 6 clases de FFA en suero humano, y solamente las enzimas con alta especificidad a él no pueden diferenciar ningún en los resultados de la medida.

3. Debido a la influencia del CoA en la reacción, la gama linear de los resultados de los datos es estrecha. El color de FFA midió en el mercado es MEHA, TBHB, TOOS, etc., pero es interferido grandemente por el CoA, y debe ser excesivo, así que se requiere interferencia. Menos cromógeno. SCEP no es interfirió por la coenzima A pero es inestable. Los RUIDOS y los TOPS son interfirieron menos por el CoA, y los TOPS tienen un coeficiente de absorción molar más alto, así que es un mejor substrato del cromógeno.

4. Añada el sulfidrilo DTNB complejo y MIT para reducir la cantidad de NEM. El grupo del sulfidrilo de DTNM puede reaccionar con el grupo del sulfidrilo de CoA para quitar la interferencia al cromógeno. Una pequeña cantidad de MIT puede quitar el grupo del sulfidrilo de CoA y también actúa como preservativo. De acuerdo con el uso del cromógeno de los TOPS, la interferencia del CoA puede ser eliminada totalmente, y la estabilidad se mejora grandemente.

Si usted tiene requisitos más altos para los resultados de la determinación de FFA, usted puede elegir un equipo de una mejor calidad basado en los puntos antedichos. Desheng produce las materias primas para el FFA y otros equipos de la determinación del índice. Si utilizan a los TOPS para determinar FFA directamente, debido a la estabilidad pobre de la solución, se recomienda para preparar una solución de trabajo para el uso inmediato antes de usar.