En la prueba bioquímica relacionada de las preparaciones enzimáticas, además de medir el contenido, la concentración, y la estabilidad de los diversos indicadores que se probarán, hay también indicadores para detectar actividad enzimática, tal como azúcar de sangre, lípidos de la sangre, y creatinina. Para los indicadores tales como oxidasis de la aminotransferasa y de la sarcosina, la actividad enzimática necesita ser medida.
Hablando en términos generales, la actividad enzimática es la actividad de la catálisis de la enzima, que implica un parámetro cinético de la enzima- Michaelis kilómetro constante, que significa la concentración del substrato (s) cuando la reacción enzimática alcanza la mitad de la velocidad máxima (VM). La velocidad de la reacción enzimática no es uniforme, no linear como la concentración, pero el número de metros en Changshu es constante, que es una cantidad física característica de la enzima. El constante de Michaelis de los cambios de la enzima con el tipo medido del substrato, la temperatura de la reacción, el pH y la fuerza iónica. Bajo mismas condiciones, no importa qué es la concentración de la enzima, la concentración del substrato requerido es lo mismo cuando se alcanza la tarifa de reacción máxima.
Método de la medida de constante de Michaelis de la oxidasis de la sarcosina:
Prepare una solución de la sarcosina con una concentración de 1,0, de 2,0, de 3,0, de 4,0, de 5,0, de 6,0, de 7,0, de 8,0, de 9,0, de 10.0mmo1/L con el almacenador intermediario Tris-HC1 de pH 8,0, y reaccione en 37°C por 5 minutos determinan la actividad inicial de la oxidación de SOX en diversas concentraciones de la sarcosina. Se obtiene la tarifa de reacción V y 1/V. Según el método de trazado recíproco del doble de Lineweaver-Burk, con 1 [s] como la abscisa y 1/V como la ordenada, los kilómetros y el Vmax de SOX a la sarcosina eran calculados.
Conclusión del constante de Michaelis de la oxidasis de la sarcosina:
El constante de Michaelis se puede utilizar para juzgar la especificidad de la enzima. Cuanto más pequeño es el valor del kilómetro, cuanto mayor es la afinidad entre la enzima y el substrato, y más conveniente el substrato es como el substrato natural de la enzima. Según la prueba y el cálculo de la oxidasis de la sarcosina arriba, la ecuación de Michaelis es y=1232.5X+8.7012 y el coeficiente de correlación es 0,9947: los valores calculados del kilómetro y de Vmax de SOX a la sarcosina son 141.6mmol/L y 0.115mmol, respectivamente/(L.min).
Debe ser observado que la oxidasis SOX de la sarcosina de diferentes fuentes tiene cierta diferencia en el constante de Michaelis de la sarcosina. Por ejemplo, el valor del kilómetro de SOX de Corynebaclerium a la sarcosina es 21mmol/L. Puesto que el constante de Michaelis no tiene nada hacer con la concentración de la enzima y el tipo de enzima, este punto se puede también utilizar para la identificación o la determinación de la enzima. Desheng bioquímico se centra en el campo de la detección bioquímica, y proporciona una variedad de preparaciones enzimáticas incluyendo SOX, la esterasa del colesterol, la oxidasis de glucosa, el etc.
