La lisis bufferCAS7365-45-9 de HEPES se utiliza para extraer la proteína nucleoplásmica

HEPES es el ácido hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic 4 (ácido) de N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanic, un polvo cristalino blanco, el almacenador intermediario de iones de hidrógeno, que puede controlar una gama constante del pH durante mucho tiempo. La gama de almacenador intermediario eficaz es pH6.8-8.2. De uso general para preparar el almacenador intermediario de la lisis de la extracción de la proteína, el almacenador intermediario del cultivo celular, el etc.

El constante de la disociación de HEPES es 7,5. Cuando es equimolar la mezcla de HEPES y de su Na-HEPES, el pH de la solución es 7,5. Generalmente, una concentración molar fija de HEPES se prepara primero, y entonces el pH se ajusta al valor especificado con una base fuerte (NaOH generalmente de uso general). Aquí, el NaOH sirve solamente proporcionar el OH. Es también posible utilizar otras bases fuertes tales como KOH. Cuando la diferencia del pH es grande, utilice el NaOH concentrado. Para ajustar, utilice el NaOH diluído. Si el sólido del NaOH se añade directamente, el error es demasiado grande, y cuando el NaOH es exotérmico disuelto y el cambio de la temperatura puede afectar a la exactitud del electrodo del pH.

Preparación del almacenador intermediario de la lisis de HEPES:

Pasos:

1. Recoja las células en un tubo y una centrifugadora (4000r/min, 5min, 4 grados) del EP.

2. Lave tres veces con PBS, centrifugúelas como arriba, deseche el sobrenadante.

3. Añada el μl 100 del almacenador intermediario A, incube en el hielo para 10 minuto, centrifugue (14000 r/min, 1 minuto), y deseche el sobrenadante.

4. Suspenda de nuevo la pelotilla en 60 microlitros del almacenador intermediario B, mézclese bien, centrifugadora en el hielo para 30min, centrifugadora (14000r/min, 15min, 0 grados), recoja el sobrenadante y deseche la pelotilla.

Entre ellos, el papel del lysate A se utiliza principalmente para liberar las proteínas citoplásmicas y las proteínas de la membrana, el lysate B se utiliza para liberar las proteínas nucleares, NP-40 es un tensioactivador y un detergente, su papel es ambos que destruye la membrana celular (suave), y puede combinar con la proteína liberada para prevenir la precipitación, tan la mayor parte de la proteína citoplásmica y la proteína de la membrana puede ser quitada después de que el sobrenadante sea quitado por la centrifugación en el primer paso. Después de que se extraiga la proteína nuclear, puede ser dializada con el lysate A para 2h y ser combinada para el IP; o diluido con otras soluciones y substituido por los tubos de centrífuga concentrados para el IP u otros experimentos.

Las materias primas principales de los reactivo de diagnóstico ines vitro de Desheng son: 1. almacenador intermediario Tris, BICINE, HEPES, CAPS, FREGONAS, GOLPECITOS, EPPS, MOPSO, TUBOS, PEP del Bis; 2. luminol quimioluminescente los reactivo, isoluminol, éster DMAE-NHS, éster NSP-DMAE-NHS, sal NSP-SA, sal NSP-SA-NHS, hidrazida NSP-SA-ADH, éster ME-DMAE-NHS de la acridina de la acridina de la acridina de la acridina de la acridina de la acridina; 3. Los reactivo TOOS, TOPS, RUIDOS, ADPS, MONTAÑAS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS de nuevo Trinder; 4. el gel para los añadidos del tubo de la colección de la sangre, heparina del sodio, heparina del litio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA de la separación de la Anti-irradiación, promueve el coagulante, el polvo de la coagulación, el etc. además, también produce los medios y el carbomer 940/980 del transporte del virus. Amigos agradables a venir comprar.