El buffer HEPESes un ácido 4-hidroxietilpiperazina-etanosulfónico (ácido N?? -a-hidroxietilpiperazina-N?? -etanosulfónico), un polvo de cristal blanco, amortiguador de iones de hidrógeno, que puede controlar un rango de pH constante durante mucho tiempo.El rango de amortiguador efectivo es de pH 6,8-8.2Se utiliza comúnmente para preparar el búfer de lisis de extracción de proteínas, el búfer de cultivo celular, etc.
La constante de disociación de HEPES es 7.5Cuando se mezcla equimolarmente HEPES y sus Na-HEPES, el pH de la solución es 7.5En general, se prepara primero una concentración molar fija de HEPES, y luego se ajusta el pH al valor especificado con una base fuerte (generalmente comúnmente utilizada NaOH).El NaOH sólo sirve para proporcionar OH. También es posible utilizar otras bases fuertes como KOH. Cuando la diferencia de pH es grande, use NaOH concentrado. Para el ajuste fino, use NaOH diluido.el error es demasiado grande, y cuando el NaOH se disuelve Exotérmico y el cambio de la temperatura puede afectar la precisión del electrodo de pH.
Preparación de amortiguador de lisis HEPES:
| Solución de lisis A: |
Solución de lisis B: |
| HEPES |
10 mmol por litro, pH 7.9 |
HEPES |
20 mmol por litro, pH 7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| El DTT |
1 mmol/l |
El DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
El 5% |
Glicerina |
El 25% |
| La EDTA |
0.2 mmol/l |
La EDTA |
0.2 mmol/l |
| NP-40, también conocido como NP-40 |
El 1% |
|
|
| PMSF (agregación antes del uso) |
1 mmol/l |
PMSF (Añadir después de uso) |
0.5 mmol/l |
| Aprotinina |
3 mg/l |
Aprotinina |
5 mg/l |
| leupeptina |
3 mg/l |
leupeptina |
5 mg/l |
| - ¿ Qué es esto? |
2 mg/l |
- ¿ Qué es esto? |
3 mg/l |
Los pasos:
1Se recogen las células en un tubo EP y se centrifugan (4000 r/min, 5 min, 4 grados).
2Lavar tres veces con PBS, centrifugar como antes, desechar el supernatante.
3Se añaden 100 μl de tampón A, se incuban en hielo durante 10 min, se centrifugan (14000 r/min, 1 min) y se desecha el supernatante.
4. Re-suspender el pellete en 60 microlitros de tampón B, mezclar bien, centrifugar en hielo durante 30 min, centrifugar (14000 r/min, 15 min, 0 grados), recoger el supernatante y desechar el pellete.
Entre ellos, el papel del lisato A se utiliza principalmente para liberar proteínas citoplasmáticas y proteínas de membrana, el lisato B se utiliza para liberar proteínas nucleares, NP-40 es tanto un tensioactivo como un detergente,su función es destruir la membrana celular (leve), y puede combinarse con la proteína liberada para evitar la precipitación,por lo que la mayor parte de la proteína citoplasmática y la proteína de la membrana se puede eliminar después de que el supernatante se elimina por centrifugación en el primer pasoUna vez extraída la proteína nuclear, puede ser dialisada con lisato A durante 2 horas y combinada para IP;o diluidos con otras soluciones y sustituidos por tubos de centrifugadora concentrada para IP u otros experimentos.
Las materias primas principales de los reactivos de diagnóstico in vitro de Desheng son: 1.Reserva biológica Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. los reactivos quimioluminiscentes luminol, isoluminol, el éster de acridina DMAE-NHS, el éster de acridina NSP-DMAE-NHS, la sal de acridina NSP-SA,Sal de acridina NSP-SA-NHSLos reactivos de la nueva Trinder son los siguientes: TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS.Gel de separación antirradiación para aditivos de tubos de recolección de sangre, heparina de sodio, heparina de litio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, promueven el coagulante, el polvo de coagulación, etc. Además, también produce medios de transporte de virus y el carbómero 940/980.Bienvenidos amigos para venir a comprar.
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