El ácido 4-hidroxietilpiperazina etanosulfónico, abreviado como HEPES en inglés, tiene un número CAS 7365-45-9. Aparece como un polvo cristalino blanco y tiene un rango de pH estable entre 6.8-8.2. Como agente amortiguador biológico, su uso más común es la regulación del pH, y es muy favorecido por los principales fabricantes en el campo del cuidado de la piel. Sin embargo, su papel crucial en la detección del virus de la rabia es poco conocido, y proporcionaremos una introducción detallada a continuación.
El dilema de los métodos tradicionales de detección del virus de la rabia
Cuando el virus de la rabia se reproduce en células infectadas, generalmente no causa efectos citopáticos (CPE), y también es difícil formar placas en condiciones de cultivo convencionales. Aunque muchos académicos nacionales e internacionales han establecido con éxito métodos de placa del virus de la rabia en células de embrión de pollo y células BHK-21, estos métodos tienen inconvenientes obvios. Algunos tienen requisitos extremadamente estrictos para las condiciones experimentales, lo que requiere un control preciso de varios factores como la temperatura, la humedad, la composición del gas, etc.; Algunos pasos de operación son complicados y requieren que los técnicos profesionales se sometan a una capacitación a largo plazo para dominarlos con competencia, lo que limita en gran medida la promoción y aplicación de estos métodos.
Aplicación innovadora de HEPES en la detección del virus de la rabia
Los investigadores descubrieron accidentalmente que HEPES puede mejorar el efecto patogénico del virus de la rabia en las células infectadas. Basándose en esta característica, los investigadores han establecido de forma innovadora un método de grabado de placa HEPES simple y rápido para el virus de la rabia.
HEPES promueve significativamente la formación de puntos de corrosión
En el experimento, las células infectadas se cultivaron a 37 ℃ durante 3-5 días, y luego un grupo de células infectadas fue tratado con HEPES. Después del procesamiento, se pueden observar claramente lesiones celulares obvias en la parte inferior de la cubierta. Posteriormente, se utilizó tinción con cristal violeta, y los puntos de corrosión eran claramente visibles. En marcado contraste, el grupo de células infectadas sin tratamiento con HEPES no mostró efectos citopáticos ni formación de placas. Este resultado experimental demuestra fuertemente que HEPES tiene un efecto promotor significativo en la formación de placas del virus de la rabia en células BHK.
El método de grabado con HEPES tiene alta sensibilidad
El ensayo de placa HEPES no solo es fácil de operar, sino que también funciona bien en la titulación de títulos de infección viral. Los datos experimentales muestran que existe una clara relación de título entre el número de placas formadas después de la infección viral y la dilución del virus. Tomando la cepa CTN-BHK del virus de la rabia como ejemplo, los títulos de infección se determinaron utilizando el ensayo de placa HEPES y el ensayo en ratones, respectivamente. Después de cuatro mediciones consecutivas, se encontró que el número de placas medidas por el método de placa HEPES oscilaba entre 1.0 × 10 ° y 4.0 × 10 * PFU/ml, mientras que los títulos de infección medidos por el método en ratones estaban entre 6.0-6.8log o 1.0 × 10 ° a 6.3 × 10/ml. Este resultado demuestra completamente la consistencia en la sensibilidad entre el método rápido de placa HEPES y el método en ratones.
El método de grabado con HEPES tiene ventajas sobresalientes
Al estudiar la titulación del título de infección de las cepas CTN-181 y CTN-BNK del virus de la rabia, se descubrió que el uso de HEPES puede inducir y mejorar eficazmente el efecto patogénico del virus de la rabia en las células infectadas. El método de operación específico es el siguiente: después de la infección viral de las células, cultívelas a 37 ℃ durante 3-5 días, agregue 50-100 mmol/L de HEPES gota a gota sobre la cubierta del medio semisólido de metilcelulosa, tiña con solución de cristal violeta después de 24 horas y seque a temperatura ambiente para calcular directamente el número de puntos de corrosión a simple vista. En comparación con los informes de literatura anteriores sobre métodos de grabado, este método tiene muchas ventajas, como velocidad, simplicidad, economía, sensibilidad y facilidad de dominio.
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