Uso del éster de la acridina en el etiquetado del ácido nucléico

El éster de acridina (nsp-dmae-nhs), polvo amarillo, número CAS: 194357-64-7, es un reactivo de quimioluminiscencia importante.las condiciones de etiquetado deEstero de acridinaLas sustancias que se encuentran en el producto se clasifican en el grupo de las sustancias clasificadas en el anexo II.

Además, el proceso de quimioluminiscencia del éster de acridina es rápido con bajo fondo, y puede emitir luz en presencia de hidróxido de sodio y peróxido de hidrógeno.Los reactivos de quimioluminiscencia del éster de acridina tienen una buena estabilidad y son fáciles de almacenar.

Además de la aplicación en el inmunoensayo, el éster de acridina también se puede utilizar para etiquetar sondas de fragmentos de oligonucleótidos para la detección de genes o detección microbiana.Los compuestos de éster de acridina son adecuados para etiquetar la cadena de ADN para hacer sondas de ADN de quimioluminiscencia.

Los resultados de la investigación médica moderna muestran que muchas enfermedades como el cáncer y las enfermedades genéticas están relacionadas con la mutación del ADN, y muchas enfermedades infecciosas son causadas por virus,bacterias o parásitos en el medio ambienteEl análisis de la secuencia específica del ADN del virus es propicio para el control de la situación epidémica.La detección de la secuencia de ADN y la mutación de la base en su cadena es de gran importancia en el cribado de genes, diagnóstico y tratamiento tempranos de enfermedades genéticas y detección de genes patógenos.

En el análisis de hibridación de ácidos nucleicos, la preparación de una sonda específica y sensible etiquetada es la clave para el éxito del análisis de hibridación de ácidos nucleicos.Los derivados del éster de acridina pueden etiquetarse directamente en la sonda de ácido nucleico sin catalizador y el rendimiento cuántico de luminiscencia no se ve afectadoAdemás, bajo ciertas condiciones, el éster de acridina etiquetado en el ADN de cadena única no híbrido se hidroliza y destruye,y sólo la doble cadena formada por la hibridación está protegida Sólo el éster de acridina puede producir quimioluminiscencia, y todo el proceso de hibridación se puede controlar sin separación.

La invención se refiere a un método para el etiquetado de ácido nucleico con éster de acridina, que comprende los siguientes pasos:

(1) Se protegieron los extremos 5' y 3' de la sonda de ADN;

(2) Etiquetado del éster de acridina: 25 mm de éster de acridina NHS se disolvieron en DMSO y se preparó 1 m de búfer HEPES (pH = 8,0). Según la relación molar de la sonda de ácido nucleico: éster de acridina NHS = 1:5, se añadió al tampón HEPES y se reaccionó a 37 °C durante 1 hora;

(3) Purificado por HPLC. En el paso (1), la protección de los extremos 5' y 3' de la sonda de ADN incluye específicamente:el uso de s-etil trifluorotioacetato para proteger el 3' final-nh 2.

Desheng tecnología ha estado investigando y desarrollandoreactivos de quimioluminiscenciaEn el caso de los esteros de acridina, los esteros de acridina se encuentran en seis grupos diferentes, los esteros de acridina y los esteros de acridina.Hay luminol y isolinol.La serie de ésteres de acridina tiene una alta eficiencia luminosa y pertenece a la luminiscencia directa.