Electroforesis del gel de la agarosa y DNA

La electroforesis del gel de la agarosa es un método de uso general para el aislamiento, la identificación y la purificación de los fragmentos de la DNA. Cuando las moléculas de la DNA están nadando en gel de la agarosa, tienen efecto de la carga y efecto del tamiz molecular. Las moléculas de la DNA están negativamente - cargado en la solución del pH sobre punto isoeléctrico y el movimiento al electrodo positivo en el campo eléctrico. Debido a la estructura repetidor de la espina dorsal del glycophosphate, la misma cantidad de DNA trenzada doble casi tiene la misma carga neta, así que pueden moverse a la dirección positiva a la misma velocidad.

Diversas concentraciones de gel de la agarosa pueden separar fragmentos de la DNA de 200bp a 50kb. En la solución de la agarosa, la concentración baja del bromuro del ethidum (EB) fue añadida en la solución de la agarosa. La banda de la DNA de 10NG se podía detectar bajo luz UV. En el campo eléctrico, negativamente - la DNA cargada emigró al ánodo en pH8.0.

El gel de la agarosa tiene las siguientes características:

(1) el tamaño molecular de la DNA en la matriz del gel es inverso proporcional al valor del logaritmo bajo, y cuanto al más grande es la molécula, más lenta es la migración.

(2) la concentración de la agarosa en un tamaño específico de la molécula linear de la DNA es diferente del gel de la agarosa en diversas concentraciones. El logaritmo de la movilidad electroforética (u) de la DNA se relaciona linear para gelificarse la concentración (t).

(3) cuando el voltaje es bajo, el índice de migración de fragmentos lineares de la DNA es proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, con el aumento de intensidad de campo eléctrico, la movilidad de los fragmentos de la DNA con diversos pesos moleculares aumentará de diversas gamas. Con el aumento de voltaje, el alcance eficaz de la separación del gel de la agarosa será reducido. Para maximizar la resolución de los fragmentos de la DNA más grandes que 2KB, el voltaje aplicado no debe exceder 5V/el cm.

(4) el comportamiento electroforético de la DNA de la temperatura de la electroforesis en electroforesis del gel de la agarosa no es afectado por la temperatura de la electroforesis. El índice de migración relativo de fragmentos de la DNA de diversos tamaños no cambia perceptiblemente entre 4 y 30 grados, pero el gel con la concentración baja de 0,5% o el gel de temperatura de fusión baja del punto es relativamente débil, preferiblemente en 4 grados.

(5) el bromuro de etidio integrado tinte del tinte fluorescente fue utilizado para detectar la DNA en gel de la agarosa. El tinte fue integrado en los pares bajos apilados y la DNA circular alargada y hecha muescas en, haciéndolo más rígido y reduciendo la movilidad linear por el 15%.

(6) la composición del almacenador intermediario de la electroforesis de la fuerza iónica y su fuerza iónica afectan a la movilidad de la electroforesis de la DNA. En ausencia de los iones, tales como uso erróneo del agua destilada para preparar los geles, la conductividad es movimientos mínimos y de la DNA apenas. En alto almacenador intermediario de la fuerza iónica (tal como almacenador intermediario de la electroforesis de 10 x), la conductancia es producción de calor muy alta y obvia.

La electroforesis del gel de la agarosa es también de uso general en el aislamiento y la identificación de ácidos nucléicos, tales como producción del mapa del endonuclease de la identificación de la DNA, de la restricción de la DNA, etc. debido a su operación conveniente, equipo simple, pequeño tamaño de muestra y alta resolución, este método tiene convertido de los métodos experimentales comunes en la investigación de la ingeniería genética. El equipo de la electroforesis del gel de la agarosa contiene 10 objetos semitrabajados de la agarosa, solución rápida de alto voltaje 15mL de la electroforesis, cargamento buffer6x de la DNA 200 L, tijeras y manuales del usuario, con 8 el agujero 6*6, 6 el agujero 6*6, 13 el agujero 6*12, 18 el agujero 6*12 y otras especificaciones.