Ventajas del biobuffer HEPES en cultivo celular

HEPESEs una preparación bioquímica importante en la industria bioquímica. Se considera que es uno de los amortiguadores importantes en el campo de la investigación biológica.Ácido N-hidroxietilpiperazina-1-etanosulfónicoEs un ácido débil, a menudo utilizado como amortiguador zwitteriónico e intermediario farmacéutico en la industria química orgánica.A menudo se selecciona como amortiguador para el cultivo de células debido a sus ventajas:

Ubicación de Desheng y productos de amortiguación

1La capacidad de descomposición del HEPES puede aumentar con el aumento de la temperatura y debilitarse con la disminución de la temperatura, pero en comparación con otros amortiguadores,su constante de descomposición no cambia mucho con la temperatura, lo que haceEl buffer HEPESEl buffer puede controlar un rango de pH constante durante un período de tiempo más largo y no tiene ningún efecto tóxico en las células.

2El pH requerido para la mayoría de las células es de 7.2-7.4, el HEPES tiene una buena capacidad tampón en este rango, pero el valor óptimo del pH varía según el tipo de célula cultivada.En el caso de las líneas celulares subculturadas, el pH es ácido (7La mayoría de los medios de cultivo dependen del bicarbonato de sodio (NaHCO3) y del sistema de CO2 para el amortiguamiento.La concentración de CO2 en la fase gaseosa debe equilibrarse con la concentración de bicarbonato de sodio en el medio de cultivo.En este caso, la tapa del frasco de cultivo celular no debe atornillarse demasiado para garantizar el intercambio de gases.

Sin embargo, después del almacenamiento durante un cierto período de tiempo, el pH del sistema tampón aumentará con la volatilización del CO2.la solución de cultivo se vuelve rápidamente púrpura cuando la célula es subcultivada y sopladaSi se cultiva con este medio de cultivo es difícil de sobrevivir, aunque sobreviva, la actividad es también muy baja y la tasa de proliferación es muy lenta.La adición de HEPES a la solución de cultivo puede evitar este problema. El HEPES puede utilizarse como amortiguador para sustituir el bicarbonato para eliminar la limitación del ambiente de cultivo de CO2 de alta concentración..

Cómo utilizar HEPES:

1. El HEPES puede añadirse directamente a la solución de cultivo preparada en la concentración requerida, y luego esterilizado por filtración.ajustar el pH a 7.2 con lN NaOH después de la disolución, filtrar y esterilizar y utilizar En este momento, la concentración de uso de HEPES es de 10 mmol/L.

2También puede prepararse en 100 veces la solución de almacenamiento (l mol/L). Antes de su uso, 99 ml de solución de cultivo se añaden a la solución de almacenamiento en ml, y la concentración final de aplicación sigue siendo de 10 mmol/L.1 mol/L (100 x) método de preparación de la solución de base de HEPES: disolver 23,8 g de HEPES en 90 ml de agua doble destilada, ajustar el pH a 7,5-8,0 con 1N NaOH, luego diluir a 100 ml con agua, filtrar y esterilizar, y dispensar los viales (2 ml/ botella), conservar a 4°C o -20°C.

Desheng Biochemical recordó que cuando se utiliza como un amortiguador para el cultivo de células,El HEPES en el medio de cultivo expuesto a la luz visible durante más de 3 horas producirá peróxido de hidrógeno tóxico para las células.Se recomienda almacenar el medio de cultivo en la oscuridad.