HEPES es una preparación bioquímica importante en industria bioquímica. Se considera ser uno de los almacenadores intermediarios importantes en el campo de la investigación biológica. El nombre químico de HEPES es: El ácido de N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonic, el carácter es polvo cristalino blanco, es un ácido débil, de uso frecuente como almacenador intermediario zwitterionic e intermedio farmacéutico en industria química orgánica. Se selecciona a menudo como almacenador intermediario para el cultivo celular debido a sus ventajas:
Productos de la ubicación y del almacenador intermediario de Desheng
1. La capacidad de la descomposición de HEPES se puede aumentar con el aumento de temperatura y debilitar con la disminución de la temperatura, pero comparado con otros almacenadores intermediarios, su constante de la descomposición no cambia mucho con la temperatura, que hace que HEPES el almacenador intermediario se convierte en el almacenador intermediario de A que mejor mantiene la estructura y la función de la enzima. El almacenador intermediario puede controlar una gama constante del pH por un periodo de tiempo más largo y no tiene ningún efecto tóxico sobre las células.
2. El pH requerido para la mayoría de las células es 7.2-7.4, HEPES tiene una buena capacidad tapón en esta gama, pero el valor de pH óptimo varía con el tipo de célula cultivado. Los fibroblastos prefieren más de gran alcalinidad (7.4-7.7), mientras que las variedades de células creadas una subcultura requieren pH ácido (7.0-7.4). La mayoría del medio de cultivo confía en el bicarbonato de sodio (NaHCO3) y el sistema del CO2 para proteger. La concentración del CO2 en la fase de gas se debe equilibrar con la concentración del bicarbonato de sodio en el medio de cultivo. En este caso, la cápsula del cultivo celular no se debe atornillar demasiado firmemente para asegurar intercambio del gas. Sin embargo, después del almacenamiento por cierto periodo de tiempo, el pH del sistema del almacenador intermediario aumentará con la volatilización del CO2. En este tiempo, la solución de la cultura llega a ser rápidamente púrpura cuando la célula se crea una subcultura y está soplada, haciendo las células cultivadas con este medio de cultivo difíciles sobrevivir. Incluso si sobrevive, la actividad es también muy baja, y la tarifa de la proliferación es muy lenta. El adición de HEPES a la solución de la cultura puede evitar este problema. HEPES se puede utilizar como almacenador intermediario para substituir el bicarbonato para eliminar la limitación del ambiente de la cultura del CO2 de la alto-concentración. La concentración final de almacenador intermediario de HEPES usada es generalmente 10-25mM.
Cómo utilizar HEPES:
1. HEPES se puede añadir directamente a la solución preparada de la cultura en la concentración requerida, y después esterilizar por la filtración. Añada 2,38 gramos de HEPES por 1000ml de la solución de la cultura, ajuste el pH a 7,2 con el NaOH del lN después de la disolución, filtre y esterilícelo y el uso en este tiempo, la concentración del uso de HEPES es 10 Mmol/L.
2. Puede también ser preparado en la solución del almacenamiento de 100 x (l mol/L). Antes de usar, 99ml de la solución de la cultura se añade a la solución del almacenamiento del lml, y la concentración final del uso sigue siendo 10mmol/L. l mol/L (método de la preparación de la solución común de 100 x) HEPES: disuelva 23.8g HEPES en el agua doble destilado 90ml, ajuste el pH a 7.5-8.0 con NaOH 1N, después dilúyalo a 100ml con agua, filtro y esterilice, y dispense los frascos (2ml/bottle), la tienda en 4℃ o -20℃.
Bioquímico de Desheng recordado que cuando está utilizado como almacenador intermediario para el cultivo celular, HEPES en el medio de cultivo expuesto a la luz visible para más que 3h producirá el peróxido de hidrógeno que es tóxico a las células. Se recomienda que el medio de cultivo esté almacenado en la oscuridad.
