¡El éster de la acridina puede detectar el daño de la DNA causado por el formaldehído y el acetaldehído!

Varios factores exógenos y endógenos, como los contaminantes ambientales, la radiación ionizante, la quimioterapia farmacológica y el metabolismo celular, pueden causar diversas formas de daño al ADN.Las rupturas de doble hebra de ADN tienen el daño más grave a la estabilidad del genoma y pueden amenazar la supervivencia de las célulasEl establecimiento de un método sencillo, rápido y sensible para detectar los efectos de la hibridación del ADN y la genotoxicidad es un tema de investigación muy significativo.Aquí hay una breve introducción al método de detección de daño al ADN.

¿Cuáles son los tipos de detección de daños en la DNA?

Los métodos de detección de daños en el ADN incluyen la electroforesis por gel, la espectrofotometría ultravioleta, la fluorescencia y la electroquímica y el análisis de la quimioluminiscencia.El análisis de quimioluminiscencia (CL) se ha utilizado ampliamente en los campos del medio ambiente y las ciencias de la vida debido a su alta sensibilidadEl formaldehído y el acetaldehído son ambos contaminantes ambientales.Estudiar la cantidad de ésteres de acridinio incrustados en el ADN antes y después del daño del formaldehído y el acetaldehído, causando cambios en la intensidad de quimioluminiscencia de los ésteres de acridinio, y estudiar el comportamiento de daño del formaldehído y el acetaldehído en el ADN.Establecer un método de análisis de quimioluminiscencia simple para evaluar el grado de daño del ADN causado por el formaldehído y el acetaldehído.

Método de detección de daños ambientales en el ADN por ésteres de acridina

1En primer lugar, remojar la célula luminiscente de vidrio utilizada en una cierta cantidad de ácido nítrico concentrado durante varias horas, acidificar y luego enjuagar con agua.Añadir 20 μL de ADN del timo de ternera de 1 mg/mL a la célula de luminiscencia acidificada, y colocarlo durante 1 hora para hacer que el ADN se adsorbe en el fondo de la piscina emisora de luz,y luego el ADN del timo del ternero no adsorbido se lava con agua secundaria para obtener la piscina emisora de luz con ADN adsorbido.

2Se añaden 50 μl de 9,6×10-7 g/ml.Ester de acridinioa la célula luminiscente, y la reacción de quimerización es durante 1h para incrustar el AE en la estructura de doble cadena de ADN, y lavar el AE no quimérico con agua secundaria.en la célula luminiscente Añadir reactivos de iniciación de luminiscencia en secuencia para detectar la quimioluminiscencia generada por AE quimerizada en el ADNCuando se detecte el daño del ADN del timo de la cría por formaldehído y acetaldehído, añadir un reactivo de daño al ADN después de la quimerización AE y utilizarlo después de un cierto período de tiempo.El segundo agua lava el AE liberado después de que el ADN está dañado, y se añade el reactivo de iniciación de la luminiscencia para detectar la intensidad de quimioluminiscencia del quimérico AE en el ADN.

Los estudios han demostrado que el éster de acridinio se puede utilizar como indicador de quimioluminiscencia con una buena estructura de doble hélice de ADN intercalada.Este método de detección es factible para el daño por rotura del ADN y el método de detección por quimioluminiscenciaLos marcadores luminiscentes de éster de acridina de Desheng tienen las propiedades de buena estabilidad hidrolítica.Estabilidad térmica y alta relación señal-ruido, y las condiciones de etiquetado son leves, la tasa de etiquetado es alta, y la separación no afecta a la separación después del etiquetado. , por lo que se considera un marcador químico ideal.