99,5% el fenol saturado Tris formuló el color CAS.77-86-1 blanco

Cómo es el fenol saturado Tris formuló el color CAS.77-86-1 blanco

Tris saturó el fenol es un líquido transparente amarillo claro, la capa más baja es la fase del fenol, y la capa superior es el almacenador intermediario ácido hidroclórico pH>7.8 de Tris. Es fenol redistilled saturado con el Tris-ácido clorhídrico (pH 8,0). Tiene un olor acre y contiene la hidroxiquinoleína del antioxidante 8. Tris saturó el fenol se utiliza para separar la DNA.

La configuración de Tris saturó el fenol: Saque el fenol redistilled del refrigerador, coloqúelo en la temperatura ambiente, y después derrita en un baño de agua 68°C. No lo ponga en un baño de agua 68°C inmediatamente para evitar que el vidrio estalle. Añada la hidroxiquinoleína 8 a 0,1% y el etanol del β-mercapto a 0,2%, (la solución común 14.4MOL/ML), se mezcla bien, la solución da vuelta amarillo, la vierte en un embudo separatory (puede también ser realizado en un cubilete), añade 1MOL/ML Tris (PH8.0) de otros solventes, lo repite después de mezclar, la dejó todavía colocarse hasta que se separe; el lanzamiento el líquido amarillo más bajo del fenol, desecha la capa superior, añade Tris sólido sobre 1g/100ml, sacude bien, quita la fase del agua, añade el   0.1MOL/ML Tris (PH8.0) para equilibrar varias veces, a pH 8,0, 0.1MOL/ML Tris (PH8.0) almacenado en una botella marrón en 4 grados.

El lysate del tejido, se asegura de que el pH sea alrededor 8,0 (añada 0,1 volúmenes de Tris-ácido clorhídrico del 1M, pH 8,0, lo ajustan a alrededor 8,0), y después añade 0,5 volúmenes de Tris saturó el fenol (puesto a un lado durante uso, quite el uso más bajo de la fase del fenol. La capa superior es una solución Tris-ácido clorhídrico para evitar que el fenol entre en contacto con el aire y para retrasar la oxidación de fenol), 0,5 volúmenes de cloroformo: alcohol isoamílico (24: 1), sacudida por 10 segundos y entonces baño de hielo por 15 minutos. Después de la centrifugación, tarde la fase del agua (capa superior) y añadir un volumen igual de isopropanol para precipitar la DNA, aclárela con etanol del 75%, y disuélvala en una cantidad apropiada de TE para su uso posterior.

Tris saturó el fenol tiene un pH mayor de 7,8 y se utiliza generalmente para la extracción de la DNA. Entre ellos, el fenol es un desnaturalizante fuerte de la proteína, que puede desnaturalizar y precipitar las proteínas en células o tejidos. La función principal de Tris es prevenir y parar la oxidación de fenoles. Si se oxidan los fenoles, las quinonas (dos anillos de benceno) serán formadas. Contiene los radicales libres fuertes, que pueden dañar la estructura de ácidos nucléicos. Al mismo tiempo, puesto que el valor de pH es mayor de 7, la DNA es en la fase del agua y el ARN es en la fase orgánica en un ambiente alcalino, para separar el sobrenadante y la DNA pueda ser obtenida.

Tris equilibró el fenol es altamente corrosivo, así que evite el contacto o la inhalación de piel. Si da vuelta rojo o marrón, indica que ha ocurrido la oxidación y no puede ser utilizada.

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